ТРАНСВАГИНАЛЬНАЯ ПУНКЦИЯ ФОЛЛИКУЛОВ

Пункция фолликулов представляет собой забор содержимого фолликулов, который осуществляется с помощью специальной иглы под контролем УЗИ. Сразу после получения (для соблюдения необходимого температурного режима в 37 градусов) эмбриологу передают пробирку с фолликулярной жидкостью, в которой содержится множество компонентов — яйцеклетка в клетках кумулюса (ооцит-кумулюсный комплекс), сама фолликулярная жидкость, клетки фолликула, мелкие сгустки крови.

Основная задача эмбриолога на данном этапе — максимально быстро визуализировать ооцит-кумулюсный комплекс, выделить его и поместить в специальную питательную среду, в которой он будет находиться до момента оплодотворения в условиях инкубатора. Лаборатория нашей клиники оснащена нагревательными поверхностями (Minitube) на всех этапах получения и передачи яйцеклеток от врача эмбриологу, что позволяет создать оптимальный температурный режим, что очень важно на данном этапе, т.к. перепады температуры критичны для дальнейшего развития эмбрионов.

ОБРАБОТКА ЭЯКУЛЯТА

В то время, как полученные ооциты помещаются на 2–3 часа до момента оплодотворения в инкубатор, проводится обработка эякулята супруга (свежего или замороженного), либо донорской спермы.

Целью данной обработки является выделение подвижной фракции морфологически нормальных сперматозоидов, очистка их от семенной плазмы, неподвижных форм сперматозоидов, сопутствующих клеток, которые могут оказать негативное влияние на функцию и ДНК нормальных сперматозоидов.

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ООЦИТОВ (СТАНДАРТНОЕ ИЛИ МЕТОДОМ ИКСИ)

Оплодотворение полученных ооцитов — ключевой момент программы ЭКО. Неправильный выбор метода оплодотворения может свести на нет все предшествующие этапы и поставить крест на результативности программы ЭКО. Существуют 2 возможных методики оплодотворения в программе ЭКО:

• стандартный;
• ИКСИ — интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида внутрь яйцеклетки.

Выбор метода оплодотворения в первую очередь определяется показателями спермограммы. При нормальных показателях эякулята в день пункции и при отсутствии других показаний, оплодотворение проводится стандартным методом.

При стандартном методе происходит "имитация" естественного процесса оплодотворения, когда в питательную среду к яйцеклетке помещается суспензия отмытых сперматозоидов и самый сильный и самый подвижный сперматозоид самостоятельно оплодотворяет яйцеклетку.

ИКСИ — в первую очередь способ преодоления мужского бесплодия, т.е. основными показаниям для его проведения являются различные отклонения в спермограмме.

Метод ИКСИ подразумевает собой отбор под микроскопом самого подвижного, самого визуально правильного
(по строению) сперматозоида и введение его в цитоплазму яйцеклетки с помощью специальной микроиглы. Использование этой методики позволяет получить оплодотворение при самых тяжелых формах мужского бесплодия, даже при наличии единичных сперматозоидов в эякуляте, либо при применении хирургических методов получения сперматозоидов из яичка или придатка яичка.

ИКСИ является одним из самых высокотехнологичных методов ВРТ, поэтому требует использования современного специализированного оборудования (инвертированный микроскоп Olympus, микроманипулятор NarishigeTakanome) и качественных расходных материалов (Origio , Vitrolife,Фемина).

ДРУГИЕ ВОЗМОЖНЫЕ ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИКСИ (ПО ПРИКАЗУ МИНЗДРАВА № 107Н):

• эякуляторная дисфункция (ретроградная эякуляция);
• отсутствие или низкий процент оплодотворения (менее 20 %) ооцитов в предыдущей программе ЭКО;
• малое количество ооцитов (менее четырех) (относительное показание);
• оплодотворение размороженных ооцитов;
• при необходимости проведения преимплантационного генетического тестирования (относительное показание).

В определенных ситуациях, эмбриолог может рекомендовать в рамках оплодотворения методом ИКСИ дополнительно использовать чашку ПИКСИ .

Суть методики PICSI заключается в том, что морфологически правильные и зрелые сперматозоиды с нормальным генетическим материалом имеют на своей поверхности достаточное количество рецепторов к гиалуроновой кислоте, что позволяет им связываться с нею на поверхности чашек PICSI. На основании этого мы косвенно можем судить о качестве генетического материала сперматозоида, который мы потенциально выбираем для оплодотворения ооцит. Для спермы со слабой связывающей способностью с гиалуронатом при проведении теста HBA, отмечено значительное увеличение показателя клинических беременностей при использовании ПИКСИ в рамках процедуры ИКСИ. Использование связанных с гиалуронатом сперматозоидов обеспечивает проведение ИКСИ лучшими из пробы сперматозоидами.

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ

После наших манипуляций яйцеклетки помещаются в инкубатор, и через 16–20 часов проводится оценка факта оплодотворения. В случае, если оплодотворение произошло правильно, зигота начинает свое культивирование до стадии бластоцисты в условиях эмбриологической лаборатории. Этот процесс проходит в рамках непрерывного нахождения эмбриона в инкубаторах, в условиях, максимально приближенных к условиям материнского организма. Газовая смесь с пониженным содержанием кислорода, постоянная температура 37 градусов, оптимальная влажность и рН, отсутствие света и вредных влияний окружающей среды поддерживаются с помощью современных инкубаторов ведущих фирм производителей (PlanerOrigio, Binder). В нашей лаборатории мы проводим культивирование эмбрионов согласно мировым тенденциям до 5–6 суток развития, и программа завершается переносом эмбрионов в полость матки или криоконсервацией эмбрионов, либо сочетанием этих процедур.

ПЕРЕНОС ИЛИ КРИОКОНСЕРВАЦИЯ ЭМБРИОНОВ

Перенос эмбрионов в полость матки является одним из самых важных и уж точно одним из самых волнительных этапов программы ЭКО. Именно перенос эмбрионов делит ЭКО на до и после. В нашей клинике для проведения переноса эмбрионов используются самые современные и безопасные катетеры ведущих мировых производителей (Labotect, Kitazato). Это позволяет добиться отличных результатов программы ЭКО. В случае, если перенос эмбрионов не рекомендуется, к примеру, при прогрессировании синдрома гиперстимуляции яичников, мы можем заморозить (криоконсервировать) эмбрионы для их сохранения.

Криоконсервация – один из самых перспективных методов ВРТ. В современных условиях, криоконсервация – абсолютно безопасный и невероятно эффективный способ реализации программы ЭКО. Существует 2 вида криоконсервации:

• медленное замораживание;
• витрификация.

Во всём прогрессивном мире и, естественно, в нашей клинике, в настоящее время используется именно последний метод – витрификация, по причине своей безопасности, высокой эффективности в плане выживаемости эмбрионов после разморозки и, как следствие, высокого процента наступления беременности.

Криоконсервация эмбрионов и ооцитов позволяет:

• модифицировать циклы ЭКО с невероятной эффективностью;
• профилактировать тяжелые формы синдрома гиперстимуляции яичников;
• реализовывать программы ЭКО с преимплантационным генетическим тестированием и сохранять материал для реализации репродуктивной функции в будущем, без дополнительной гормональной нагрузки на организм.

ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЙ ХЕТЧИНГ (ПО ПОКАЗАНИЯМ)

При некоторых обстоятельствах, в рамках программы ЭКО, может понадобиться применение вспомогательного хетчинга. 

Вспомогательный хетчинг  — это надсечение, истончение или полное удаление блестящей оболочки эмбриона, с целью облегчить его вылупление из оболочки и последующую имплантацию. С помощью ВХ можно преодолеть проблемы, связанные с затвердеванием блестящей оболочки, обеспечить более ранний контакт эмбриона с эндометрием, что ведет к инициации имплантации.

РЯД КЛИНИЧЕСКИХ ПОКАЗАНИЙ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ВСПОМОГАТЕЛЬНОГО ХЕТЧИНГА:

• повышенный базальный уровень ФСГ;
• предшествующая криоконсервация эмбрионов;
• толщина блестящей оболочки более 18 нм;
• повышенный процент фрагментации эмбриона и количество бластомеров менее 6;
• последующая биопсия эмбриона.

Спектр показаний для выполнения вспомогательного хетчинга в рамках программ ВРТ в разных клиниках может варьироваться, т.к. до сих по не существует единогласного мнения относительно необходимости его выполнения в том или ином случае, существует множество взаимоисключающих исследований о целесообразности применения вспомогательного хетчинга в рамках реализации программ ВРТ. Но в любом случае, и это, пожалуй, самое важное, грамотно выполненный вспомогательный хетчинг не ухудшает результат программы ВРТ.

В нашей клинике используется лазерный хетчинг, который не требует использования дополнительных расходных материалов, эмбрион находится вне инкубатора считанные секунды, и вероятность повреждения клеток при данной манипуляции минимальна. Для этого используется специальный высокотехнологичный лазер с компьютерным оборудованием и программным обеспечением.